光遗传和化学遗传在中医药脑科学研究中的应用

自人类脑科学研究计划开始以来，中医药以其独特的优势逐渐与脑科学研究紧密结合。在此期间涌现了大量新理念、新技术及新成果，极大地促进了中医药新技术的开发，加快了中医药现代化的步伐。但是诸多的研究手段都有一定的局限性，导致中医药脑科学研究的进一步发展非常有限。近年来，光遗传学技术和化学遗传学技术具有细胞类型特异性、高精度时空分辨率、神经网络功能性解剖特性，在神经科学领域得到了广泛运用，为临床治疗脑部疾病提供了一种新的策略。因此，本文主要阐述光遗传学技术和化学遗传学技术的原理、应用以及助力中医药脑科学研究的进一步发展。     

Hsa-miR-4282对肝癌细胞系SMMC-7721生长的影响

目的  探讨Hsa-miR-4282在肝癌细胞系SMMC-7721中的表达及其对细胞生长的影响。方法 采用实时荧光定量PCR法检测Hsa-miR-4282在人正常肝上皮细胞系HL-7702和人肝癌细胞系MHCC97-H、SMMC-7721，以及 20例肝癌组织及其相应癌旁组织中的表达。采用瞬时转染法将Hsa-miR-4282 mimics（上调组）和Hsa-miR-4282 inhibitor（下调组）分别转染肝癌SMMC-7721细胞，上调组和下调组分别设置相应阴性对照组。转染后采用MTT法检测细胞增殖能力，平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果 Hsa-miR-4282在肝癌组织、肝癌细胞MHCC97-H及肝癌细胞SMMC-7721中的表达均低于癌旁组织及正常肝细胞HL-7702（P＜0.05）。MTT实验结果显示，Hsa-miR-4282上调后肝癌SMMC-7721细胞的OD值低于其阴性对照组，而下调后OD值高于其阴性对照组 （P＜0.05）。平板克隆形成实验显示，下调组的细胞克隆数高于其阴性对照组［（240±7） 个 vs （191±10） 个，P=0.005）］，而上调组细胞克隆数低于基阴性对照组［（146±10） 个 vs （193±12） 个，P=0.013）］。流式细胞仪检测结果显示，Hsa-miR-4282上调组细胞凋亡率较其阴性对照组升高［（23.89±1.89）% vs（16.6±1.14）%，P=0.009）］，下调组细胞凋亡率较期阴性对照组降低［（14.98±0.46）% vs （17.79±0.73）%，P=0.010］。结论 Hsa-miR-4282上调可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖，促进细胞凋亡，可能与肝癌的发病机制有关。     

结核病患者外周血γ干扰素释放试验假阴性的相关因素分析

目的 分析影响结核病患者外周血γ干扰素释放试验(interferon-gamma release assay,IGRA)检测假阴性的影响因素。方法 回顾性分析2018年1月至2020年3月解放军总医院第八医学中心结核四科收治的资料完整、外周血IGRA检测阴性和阳性的结核病患者,分别作为IGRA假阴性组(38例)和IGRA阳性组(119例),收集其一般情况、病史特点、血清生化指标和外周血淋巴细胞亚群,采用单因素和多因素logistic回归分析导致IGRA检测结果假阴性的影响因素。结果 IGRA假阴性组淋巴细胞计数、T细胞计数、CD4⁺T细胞计数、CD8⁺T细胞计数、NKT细胞计数M(Q₁,Q₃)分别为1.15(0.77,1.58)×10⁹个/L、867.50(508.75,1135.50)个/μl、493.00(256.00,673.75)个/μl、254.50(170.25,429.25)个/μl、38.50(16.50,88.25)个/μl,均明显低于IGRA阳性组[分别为1.46(0.99,1.88)×10⁹个/L、1013.00(667.00,1394.00)个/μl、590.00(386.00,850.00)个/μl、335.00(232.00,561.00)个/μl、57.00(30.00,121.00)个/μl,差异均有统计学意义(Z值分别为-2.512、-2.143、-2.092、-2.303、-2.338,P值分别为0.012、0.032、0.036、0.021、0.019)。logistic回归分析结果显示,NKT细胞计数低于正常值(<40个/μl)的患者,IGRA检测出现假阴性的风险是NKT细胞计数正常者的2.440倍(95%CI:1.159~5.134)。结论 NKT细胞计数的减少可能导致外周血IGRA出现假阴性。     

Association of heart rate and diabetes among 0.5 million adults in the China Kadoorie biobank: Results from observational and Mendelian randomization analyses

Background and aimsObservational studies have associated resting heart rate with incident diabetes. Whether the associations are causal remains unclear. We aimed to examine the shape and strength of the associations and assessed the causal relevance of such associations in Chinese adults.Methods and resultsThe China Kadoorie Biobank enrolled 512,891 adults in China. Cox proportional hazard regression models was conducted to estimate hazard ratios (HRs) for the associations of resting heart rate with type 2 diabetes and total diabetes. Among 92,724 participants, 36 single-nucleotide polymorphisms (SNPs) related to resting heart rate were used to construct genetic risk score. We used Mendelian randomization analyses to make the causal inferences. During a median follow-up of 9 years, 7872 incident type 2 diabetes and 13,349 incident total diabetes were documented. After regression dilution bias adjustment, each 10 bpm higher heart rate was associated with about a 26% higher risk of type 2 diabetes (HR, 1.26 [95% CI, 1.23, 1.29]) and 23% higher risk of total diabetes (HR, 1.23 [95% CI, 1.20, 1.26]). Instrumental variable analyses showed participants at top quintile compared with those at bottom quintile had 30% higher risk for type 2 diabetes (HR, 1.30 [95% CI, 1.17, 1.43]), and 10% higher risk for total diabetes (HR, 1.10 [95% CI, 1.02, 1.20]).ConclusionsThis study provides evidence that resting heart rate is an important risk factor for diabetes risk. The results suggest that novel treatment approaches targeting reduction of high heart rate for incidence of diabetes may be worth further investigation.     

循环肿瘤细胞数量变化在预测局限性肾癌术后复发转移中的作用CSCD

目的探讨局限性肾癌患者行部分切除术后循环肿瘤细胞数量的变化在预测肿瘤复发转移中的作用。方法收集41例局限性肾癌患者,依据术前及术后3月循环肿瘤细胞数量变化分为阳性组(n=23)和阴性组(n=18)。对两组患者进行随访,终点事件为肿瘤复发转移。对所得数据进行统计学分析。结果阳性组复发转移率为43.5%,明显高于阴性组11.1%,差异有统计学意义(P=0.024);阳性组5年生存率为58.0%,阴性组为88.9%,差异有统计学意义(P=0.048)。结论术后3月循环肿瘤细胞计数较术前增加的局限性肾癌患者易出现复发转移。循环肿瘤细胞数量变化可作为较好的术后监测指标。     

二甲双胍增强放射对CT26WT细胞及小鼠移植瘤效应机制研究

目的 探讨二甲双胍(Met)联合放射对结肠癌CT26WT细胞及移植瘤的抑制作用及其机制研究。方法 利用CellTiter-Glo化学发光细胞活性试验检测0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L的Met对CT26WT细胞活力影响,克隆形成试验检测对照组、10.0μmol/L的Met、15Gy照射、15Gy+10.0μmol/L的Met组对CT26WT细胞的增殖抑制作用。构建Bablc小鼠皮下移植瘤模型,肿瘤体积>150mm³随机分对照组、单纯15Gy照射、Met组、15Gy+Met组,照射前24h给予小鼠750 mg/kg的Met,定期测量肿瘤体积及小鼠体重绘制肿瘤生长曲线及生存时间曲线。蛋白质印迹法检测上述处理条件下CT26WT细胞及移植瘤组织中P-H2AX、Sting蛋白表达;并利用免疫组化方法检测移植瘤组织中CD8a (+) T细胞的浸润情况。结果 0、0.5、1.0、5.0、10.0μmol/L的Met的相对细胞存活率分别为100%、87.9%、87.8%、87.3%、76.5%(P<0.05),其中10.0μmol/L较5.0μmol/L抑制作用更强(P<0.001)。克隆形成实验结果显示对照组、Met组、15Gy组、15Gy+Met组细胞克隆形成率分别为34.0%、24.0%、22.3%、14.0%(P<0.001)。与对照组比较,Met组、15Gy组、15Gy+Met组细胞内Sting蛋白表达分别增加2.99、1.37、4.41倍(P<0.001、<0.01、<0.001)。15Gy+Met组P-H2AX蛋白表达较15Gy组增加1.43倍(P<0.001)。移植瘤体积15Gy+Met组较对照组生长缓慢,最终结果为(1007.0±388.5)、(2639.0±242.9) mm³,(P<0.05),15Gy+Met组小鼠总生存期较对照组增加(48d︰32d,P<0.001)。移植瘤组织中P-H2AX、Sting蛋白表达量在15Gy+Met组较对照组分别增加8.8、1.6倍(P均<0.001)。15Gy+Met组CD8a (+) T细胞浸润在较对照组明显增高(P<0.01)。结论 Met与放射联合能协同抑制结肠癌细胞增殖、克隆形成,可能作用机制是通过加重DNA损伤、激活Sting信号通路导致肿瘤组织中CD8a (+) T细胞增加加强对肿瘤细胞的杀伤作用。     

3D打印头膜固定技术在头部肿瘤放疗的应用研究

目的 为头部放疗患者定制个体化3D打印头膜,通过与热塑头膜对比,评价其材质的物理特性及该技术的摆位精准度。方法 分别将3D打印头膜和热塑头膜置于固体水表面,通过电离室和胶片测量深度5cm处和表面剂量来进行剂量学评估。选取30例头部放疗患者随机分为对照组和试验组,分别采用热塑头膜和3D打印头膜进行固定,通过CBCT获取患者X、Y、Z方向的平移和旋转摆位误差来进行临床摆位误差评估。结果 深度5cm处两种材质对射线衰减率均<1%。表面位置热塑头膜剂量升高27%,3D打印头膜升高18%。两组患者各取116组摆位误差数据,对照组和试验组X、Y、Z方向平均平移误差分别为1.29mm和1.16mm、1.42mm和1.24mm、1.38mm和1.16mm;平均旋转摆位误差分别为1.29°和1.08°、1.02°和0.96°、1.01°和1.00°。与对照组相比,试验组患者在Y、Z方向平移摆位误差和X方向旋转摆位误差不同(P<0.05),其他方向相近(P>0.05)。结论 3D打印头膜体位固定技术符合现代放疗的精准摆位要求,具有较高的临床实用价值,可用于进一步临床研究。     

放疗后心脏损伤的早期影像检出

放射性治疗（radiotherapy，RT）是肿瘤的重要治疗手段之一，增加了患者的生存率。但是在胸部放射治疗过程中，心脏不可避免地受到影响，引起放射性心脏损伤（rdiation-induced heart disease，RIHD）。RIHD可涉及心脏的任何结构，已成为威胁癌症患者生存的主要并发症之一，近年来越来越受到临床关注。RIHD的早期检出对于癌症患者尤其年轻癌症患者具有重要的临床意义。目前尚无关于RIHD统一明确的早期诊断标准，而影像学检查能够早期、准确地检出RIHD，不同的影像学检查在RIHD的检测中有着不同的意义。本文就RIHD早期的影像检出作一简要综述。     

药物相关性颌骨坏死的研究进展

双磷酸盐（bisphosphonates，BPs）等药物通过抗血管生成，同时抑制骨吸收，进而增强骨质被广泛应用于临床，但此类药常导致颌骨严重并发症，引起广泛关注。本文对药物相关性骨坏死（medication-related osteonecrosis of the jaw ，MRONJ）研究进行总结，为此类疾病的临床治疗提供一定帮助。     

Long Noncoding RNA WEE2-AS1 Plays an Oncogenic Role in Glioblastoma by Functioning as a Molecular Sponge for MicroRNA-520f-3p

The long noncoding RNA WEE2 antisense RNA 1 (WEE2-AS1) plays an oncogenic role in hepatocellular carcinoma and triple negative breast cancer progression. In this study, we investigated the expression and roles of WEE2-AS1 in glioblastoma (GBM). Furthermore, the molecular mechanisms behind the oncogenic actions of WEE2-AS1 in GBM cells were explored in detail. WEE2-AS1 expression was detected using quantitative real-time polymerase chain reaction. The roles of WEE2-AS1 in GBM cells were evaluated by the cell counting kit-8 assay, flow cytometric analysis, Transwell cell migration and invasion assays, and tumor xenograft experiments. WEE2-AS1 expression was evidently enhanced in GBM tissues and cell lines compared with their normal counterparts. An increased level of WEE2-AS1 was correlated with the average tumor diameter, Karnofsky Performance Scale score, and shorter overall survival among GBM patients. Functionally, depleted WEE2-AS1 attenuated GBM cell proliferation, migration, and invasion in vitro, promoted cell apoptosis, and impaired tumor growth in vivo. Mechanistically, WEE2-AS1 functioned as a molecular sponge for microRNA- 520f-3p (miR-520f-3p) and consequently increased specificity protein 1 (SP1) expression in GBM cells. A series of recovery experiments revealed that the inhibition of miR-520f-3p and upregulation of SP1 could partially abrogate the influences of WEE2-AS1 downregulation on GBM cells. In conclusion, WEE2-AS1 can adsorb miR-520f-3p to increase endogenous SP1 expression, thereby facilitating the malignancy of GBM. Therefore, targeting the WEE2-AS1–miR-520f-3p–SP1 pathway might be a promising therapy for the management of GBM in the future.